晶抗生物MOC1細(xì)胞系實(shí)驗(yàn)規(guī)則介紹如下:

T150燒瓶 ：07-200-64

T75燒瓶 ：10-126-37

冷 凍 劑 ：03-374-059

45um過(guò)濾器 ：09-754-21

惰性譜線(xiàn) ：MOC1,22

侵略性線(xiàn) ：MOC2

IMDM ：sh30228.02 Hams

營(yíng)養(yǎng)混合物F10-F12 ：sh30026.01胎牛血清，特征-海克隆

目錄 / 批次號(hào) ：sh30071.03 / AWK24001

過(guò)濾1L過(guò)濾器瓶的過(guò)濾器 ：09-761-108

科學(xué)試劑目錄編號(hào) 胰島素：I6634-50mg　　

EMD微孔試劑目錄編號(hào) ：表皮生長(zhǎng)因子(EGF），重組人：01-107

解凍細(xì)胞系

1. 在解凍前，將21ml IMDM MOC線(xiàn)培養(yǎng)基加入到T150中(如果想解凍成T75，則將10ml加入到T75 中）2. 將液氮從冷凍瓶中取出，噴上含有70%酒精的小瓶進(jìn)行清洗。

3.將冷凍瓶的下半部分放在37攝氏度的水浴中(不讓蓋子接觸水，以避免污染），直到 有一小塊冰漂浮著。

4.再次用ETOH噴灑冷凍瓶，然后放在引擎蓋上。將1ml培養(yǎng)液移液管加入到1ml細(xì)胞中，并將這 些2ml加入到已經(jīng)含有培養(yǎng)基的T150中(使一個(gè)T150總共有22ml）。

5.在T150燒瓶中取一些培養(yǎng)基，沖洗冷凍瓶，然后平板放置，以確保所有殘留的細(xì)胞都留在冷 凍瓶中。

冷凍細(xì)胞系

1. 從T150中收集細(xì)胞

2. 在15ml錐形管中旋轉(zhuǎn)成顆粒(1000 RPM x5分鐘）

3. 排出上清液

4. 點(diǎn)擊15ml圓錐形管，重懸細(xì)胞

5. 加入1.5ml IMDM MOC系培養(yǎng)基，在培養(yǎng)基中重建細(xì)胞-保持冰上

6. 管入冰時(shí)緩慢加入1.5 ml冷凍介質(zhì)(在IMDM MOC線(xiàn)介質(zhì)中制作冷凍介質(zhì)-20%DMSO。例：20ml庫(kù)存-加入16ml IMDM MOC線(xiàn)培養(yǎng) 基和4ml DMSO。注射器過(guò)濾器，使用um過(guò)濾器

7. 每份1毫升到3個(gè)冷凍瓶

8. 在-80攝氏度內(nèi)儲(chǔ)存不超過(guò)2周

9. 在1-2周內(nèi)放入液氮溶液中

注：如果需要，可增加到2ml IMDM和2ml冷凍培養(yǎng)基，以?xún)?chǔ)存在4個(gè)小瓶中。此外，最好在冷凍細(xì)胞 前計(jì)數(shù)細(xì)胞并記錄在小瓶上。

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