根據實驗室技術案例，以下為大家分享免疫熒光技術的操作方法流程。

免疫熒光技術（immunofluorescence，IF）是根據抗原-抗體反應的原理，先將已知的抗原或抗體標記上熒光素制成熒光標記物，再用這種熒光抗體（或抗原）作為分子探針檢查細胞或組織內的相應抗原（或抗體）。用免疫熒光技術顯示和檢查細胞或組織內抗原物質或半抗原物質等方法稱為免疫熒光細胞（或組織）化學技術。

免疫熒光技術的操作流程：

（1）選取一抗時要來源于兩種不同的動物，我用的是來源于rabbit和rat的抗體，二抗則是不同熒光信號標記的，我用的是donkey anti-rabbit-FITC（綠）和donkey anti-rat-Tex-Red（紅）。

（2）我的做法是兩種一抗同時孵育，然后兩種二抗同時孵育。抗體濃度、孵育時間要仔細摸索，我感覺一抗4度孵育過夜比較好，背景比較清晰。

（3）我的陽性對照用的是陽性組織切片，陰性對照則分別是家兔和大鼠的IgG，熒光標記物對照是PBS+熒光標記物。

（4）封閉血清與二抗來源動物一致，我用的是10%的正常donkey血清。

（5）其余步驟同一般免疫熒光單標操作。

免疫熒光技術的使用方法：

（1）直接熒光法 將熒光素標記在相應的抗體上，直接與相應抗原反應。其優點是方法簡便、特異性高，非特異性熒光染色少；缺點是敏感性偏低，而且每檢查一種抗原就需要制備一種熒光抗體。此法常用于細菌、病毒等病原微生物的快速鑒定。

（2）間接熒光法 用一抗與標本中抗原結合，再用熒光素標記的二抗染色。該法優點是敏感度比直接法高，制備一種熒光素標記的二抗即可用于多種抗原的檢查，但非特異性反應亦增加。染色程序分為兩步，首先用未知未標記的抗體（待檢標本）加到已知抗原標本上，在濕盒中37℃保溫30min，使抗原抗體充分結合，然后洗滌，除去未結合的抗體；然后加上熒光標記的抗球蛋白抗體或抗IgG、IgM抗體。如果*步發生了抗原-抗體反應，標記的抗球蛋白抗體就會和已結合抗原的抗體進一步結合，從而可鑒定未知抗體。 由于免疫熒光技術的特異性、快速性和在細胞和分子水平定位的敏感性與準確性，在動物檢驗檢疫方面得到了廣泛應用。