人胎盤絨毛膜細胞培養(yǎng)方法

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培養(yǎng)工作中，主要從以下幾個方面來預防細胞支原體的污染：

A. 控制環(huán)境污染

B. 嚴格實驗操作

C. 細胞培養(yǎng)基和器材要保證無菌

D. 在細胞培養(yǎng)基中加入適量的抗生素

E. 避免細胞污染，可以從預防著手，超凈工作臺物品放置要合理、進入細胞房要換鞋和穿實驗服、實驗員戴手套后要用酒精等消毒、避免細胞交叉污染等等

培養(yǎng)準備和安裝過濾器：

清洗好過濾器，干燥，放入一張孔徑0.22μm的微孔濾膜，用布包裝好，15磅20 min進行高壓滅菌處理。 在超凈臺內打開過濾器架好，膠管一端接入濾泵再插入待除菌的液體中，出口端膠管深入到已消毒好的瓶子中。用泵過濾，過濾后要檢查濾膜是否完好無損。

保存應用及安全性：

保存應用：新鮮細胞，請于收到后放入二氧化碳培養(yǎng)箱內靜置2-3小時后再進行實驗操作；如是凍存細胞，收到后可放入液氮或-80℃冰箱保存也可進行復蘇操作。

安全性：所有腫瘤和病毒轉染的細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需高壓滅菌后方能丟棄。收到細胞后，在倒置鏡下(是在4X物鏡)觀察整個細胞生長情況。

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細胞復蘇步驟：

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

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