WB-F344大鼠肝上皮樣細(xì)胞培養(yǎng)方法

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WB-F344大鼠肝上皮樣細(xì)胞培養(yǎng)方法

實(shí)驗(yàn)人員的無菌準(zhǔn)備

1、肥皂洗手

2、穿好隔離衣，換好拖鞋

3、用75%的酒精棉球擦拭雙手

服務(wù)流程：

預(yù)約登記→辦理相關(guān)手續(xù)→復(fù)蘇細(xì)胞→細(xì)胞質(zhì)量檢查→發(fā)送細(xì)胞（或自己來取細(xì)胞）→細(xì)胞售后技術(shù)咨詢答疑。

養(yǎng)方法如下：

1、從手術(shù)室無菌取腦髓灰質(zhì)或白質(zhì)后，仔細(xì)剝除腦膜、血管和纖維成分，置Hanks液中漂洗一、二次。

2、置于30—50倍體積的Hanks液中，此時(shí)腦組織比較柔軟，反復(fù)吹打即制成細(xì)胞懸液。

3、把懸液注入離心管室溫中直立5—10分鐘后，細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)快自然下沉，脂肪等雜物易漂浮，可吸除上層、反復(fù)二、三次，即可排除脂肪成分和其它碎塊并獲較多細(xì)胞成分。

4、在沉降物中加入適量培養(yǎng)液，通過紗網(wǎng)成紗布過濾，計(jì)數(shù)并調(diào)整細(xì)胞密度。

5、接入培養(yǎng)瓶或皿中，置5%CO2溫箱中培養(yǎng)。

細(xì)胞培養(yǎng)無菌操作規(guī)范

1. 打開無菌工作臺及凈化室的紫外燈，消毒半小時(shí)以上。

2. 進(jìn)入凈化室前先關(guān)閉紫外燈，打開超凈臺風(fēng)機(jī)，等待30min以上，以排盡臭氧。

3. 穿好隔離衣，戴好口罩，帽子。

4. 風(fēng)淋2分鐘。

5. 0.1%過氧乙酸水泡手，擦干。

6. 點(diǎn)燃酒精燈，超凈臺內(nèi)應(yīng)避免放入過多的物品，使用的吸管，滴管，試管，培養(yǎng)瓶等均事先滅菌。

7. 打開各類瓶蓋前先過火，以固定灰塵，打開的瓶口、試管口過火焰，鑷子使用前應(yīng)經(jīng)火焰燒灼。

8. 水平式風(fēng)機(jī)的超凈臺，應(yīng)使瓶口斜置，應(yīng)盡量避免瓶口敞開直立。

9. 同一根吸管或滴管不應(yīng)連續(xù)用于幾個(gè)不同的細(xì)胞系，吸取培養(yǎng)基的吸管應(yīng)離開培養(yǎng)瓶或試管口0.5cm，避免伸入培養(yǎng)瓶口或試管口，以防止細(xì)胞系的互相混雜污染。

10. 漏在培養(yǎng)瓶上或臺上的液體，立即用酒精棉球擦凈。

11. 操作完畢后恢復(fù)工作臺面。

售后規(guī)定：

1. 所有細(xì)胞免費(fèi)售后期為一周，一周內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)出現(xiàn)異常及時(shí)拍照反饋，超出一周沒有任何反饋視為細(xì)胞培養(yǎng)正常，后期若出現(xiàn)培養(yǎng)問題不再免費(fèi)重發(fā)。

2. 售后僅針對由于細(xì)胞自身狀態(tài)問題導(dǎo)致不可傳代的情況，若客戶收貨一周內(nèi)已經(jīng)傳代或轉(zhuǎn)移細(xì)胞多次，出現(xiàn)死亡或者污染時(shí)不予免費(fèi)售后，若客戶在我方未允許的情況下，擅自遺棄細(xì)胞，視為客戶自身問題導(dǎo)致細(xì)胞異常，不予免費(fèi)售后。

3.凍存細(xì)胞發(fā)貨2管，客戶先復(fù)蘇一支，若復(fù)蘇失敗及時(shí)聯(lián)系我方并在我方指導(dǎo)下復(fù)蘇第二支，若客戶未反饋并復(fù)蘇2管失敗，我方將不提供免費(fèi)售后服務(wù)，凍存細(xì)胞售后均發(fā)復(fù)蘇培養(yǎng)的，若要重發(fā)凍存細(xì)胞，需補(bǔ)加干冰運(yùn)輸費(fèi)用。

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